免疫亲和柱验证门径免疫亲和柱行使留苦衷项和柱行使门径色谱柱和层析柱的区分

　　细胞/ml，或往汇集的细胞或结构匀浆中出席1~5倍体积的TSA。再出席等体积的严寒裂解缓冲液，于4℃搅拌1 h。

　　3.  以4 000 g 离心10 min，除细胞核，轻轻倒出上清，保存之。4.  关于提纯膜抗原，正在去细抱核的上清中出席0.2倍体积的5%脱氧胆酸钠，于水浴或 4℃安插10 min，改观至quick-seal离心管100 000 g 离心1 h，幼心移出上清并保存之。5.  将预柱相连于免疫亲和层析柱。

　　7.  将上清（保存极少样品待剖析用）上样于预柱，让它们以5柱床/h 的流速流过预柱和免疫亲和层析柱，按加样上清体积的1/10~1/100分部汇集穿透液。

　　8.  用5倍体积的洗涤缓冲液洗柱子，然后合上两根柱子的止水阀。拆离亲和柱与预柱的相连，掀开亲和柱的止水阀，让柱床上面的液体流至柱床表面。

　　10.  以5倍体积的三乙醇胺溶液洗脱，将每一个柱床体积的洗脱液汇集于含0.2体积的1 mol/l Tris·Cl 缓冲液，pH6.7的试管中，以中和冼脱液。11.  以5倍体积的TSA溶液洗柱子。12.  剖析含抗原的洗脱液组分：每份洗脱液取50 μl SDS-PAGE银染剖析。取0.5~ 1 ml 上柱样品和有代表性的穿透流出液及洗脱液以Ab-Sepharose免疫共重淀，并接着举行SDS-PAGE和银染检测以确定柱子是否已被饱和。防备事项正在每次退换缓冲液时，按下述进程洗免疫亲和柱：

　　3.  将管子移至盛正在另一贮槽中的另一种洗柱缓冲液中，用打针器抽吸，使管子充满液体，取走打针器，调度流速，并用此缓冲液冼柱子的内壁。